Active Surfactant Protein C (SP-C) (APB623Mu01)

Белок, ассоциированный с сурфактантом C (SPC), является мембранным белком, участвующим в синтезе сурфактанта. N-концевой альфа-спиральный сегмент пропептида SPC предположительно стабилизирует структуру белка, предотвращая его необратимую трансформацию из нативной альфа-спиральной конформации в бета-слоистые агрегаты и образование амилоидных фибрилл. Поскольку эукариотический фактор инициации трансляции 2-альфа киназа 3 (EIF2aK3) идентифицирован как партнер взаимодействия SPC, для детекции связывания рекомбинантного мышиного SPC и рекомбинантного мышиного EIF2aK3 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: SPC серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые EIF2aK3, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к SPC, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего раствор удаляли и лунки промывали три раза. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание SPC с EIF2aK3.