Active Surfactant Protein C (SP-C) (APB623Ra01)

Белок, ассоциированный с сурфактантом C (SPC), является одним из белков легочного сурфактанта; это мембранный белок, участвующий в синтезе сурфактанта. Про-пептид легочного сурфактанта C содержит N-концевой альфа-спиральный сегмент, предполагаемая функция которого заключается в стабилизации структуры белка, поскольку последний может необратимо трансформироваться из нативной альфа-спиральной структуры в бета-слоистые агрегаты с образованием амилоидных фибрилл. Кроме того, монокин, индуцированный интерфероном гамма (MIg), был идентифицирован как партнер взаимодействия SPC, в связи с чем был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного SPC и рекомбинантного крысиного MIg. Кратко: SPC серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые MIg, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к SPC, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания SPC с MIg представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Активность связывания SPC с MIg.