Active Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) (APC241Hu01)

Теломераза обратная транскриптаза (TERT) представляет собой субъединицу ферментного комплекса теломеразы, который добавляет нуклеотиды к концам теломер по мере их укорочения в ходе деления клетки. Комплекс теломеразы играет ключевую роль в канцерогенезе посредством теломер-зависимых или теломер-независимых механизмов. Согласно статистическим данным, человеческая теломераза обратная транскриптаза (h-TERT) сверхэкспрессирована более чем в 85% опухолей различной гистологической структуры при низкой экспрессии в нормальных тканях. Экспрессия h-TERT коррелирует с активностью теломеразы, необходимой для приобретения способности к неограниченной репликации, что является характерным признаком рака. Белок XRCC6 (X-Ray Repair Cross Complementing 6) является рецептором с высоким сродством к TERT; в связи с этим был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TERT и рекомбинантного крысиного XRCC6. Кратко: TERT серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые XRCC6, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TERT, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания рекомбинантного TERT и рекомбинантного крысиного XRCC6 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,009 мкг/мл.