Active Thrombopoietin (TPO) (APA135Mu01)

Тромбопоэтин (TPO) является гуморальным фактором роста, необходимым для пролиферации и созревания мегакариоцитов, а также для тромбопоэза. TPO стимулирует продукцию тромбоцитов, их агрегацию, адгезию к внеклеточному матриксу и активацию. Белок преимущественно синтезируется в печени и связывается с рецептором Tpo R/c-mpl, после чего интернализируется. Данный белок служит лигандом для MLP/C_MPL - продукта онкогена вируса миелопролиферативной лейкемии; мутации в этом гене являются причиной тромбоцитемии 1-го типа. Кроме того, установлено, что G-CSF взаимодействует с TPO, в связи с чем был проведен функциональный ИФА связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного мышиного TPO и рекомбинантного мышиного G-CSF. Кратко: биотинилированный TPO серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые G-CSF, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки трижды промывали буфером PBST, затем инкубировали со стрептавидин-пероксидазой хрена (HRP) в течение 30 мин, после чего раствор удаляли и лунки промывали пять раз. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания TPO и G-CSF представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,68 мкг/мл.