Active Thymidine Kinase 1, Soluble (TK1) (APC823Hu01)

Проведен анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного человеческого тимидинкиназы 1 (TK1) и рекомбинантной человеческой глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH). TK1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые GAPDH, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к TK1 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Для детекции в лунки вносили субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора, после чего немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание TK1 с GAPDH.