Active Thymosin Beta 4 (TMSB4X) (APB609Hu03)

Тимозин бета-4 (T beta 4; также TB4X и Fx) представляет собой молекулу семейства бета-тимозинов с молекулярной массой 5,0 кДа, играющую важную роль в организации цитоскелета. Сообщается, что TMSB4X способен связываться с PFN1, ингибируя полимеризацию актина. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TMSB4X и рекомбинантного человеческого PFN1 был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: TMSB4X серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые PFN1, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TMSB4X, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трижды промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания TMSB4X и PFN1 представлена на рисунке 1; значение EC50 для данного эффекта составило 2,98 нг/мл.