Active Tissue Factor (TF) (APA524Ra01)

Тканевой фактор (TF), также известный как тромбопластин, фактор III или CD142, представляет собой гликопротеин клеточной поверхности, присутствующий в субэндотелиальных тканях и лейкоцитах. TF необходим для инициации образования тромбина из зимогена протромбина. Было доказано, что эпидермальный фактор роста (EGF) способен связываться с TF на гемангиоэндотелиоцитах. В связи с этим был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного TF и рекомбинантного крысиного EGF. Кратко: TF серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы TF объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, предварительно покрытые EGF, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки лунок буфером PBST в них вносили поликлональные антитела к TF (anti-TF pAb) и инкубировали 1 ч, затем содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичные антитела, конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли содержимое и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания TF и EGF представлена на Рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер.