Active Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 3 (TIMP3) (APA129Ra01)

Проводили анализ связывания методом ИФА для оценки взаимодействия рекомбинантного TIMP3 крысы и рекомбинантного MMP2 крысы. TIMP3 последовательно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Образцы объемом 100 мкл в двух повторностях вносили в лунки планшета, покрытые MMP2, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TIMP3, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее вносили вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37°C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют дозозависимое связывание TIMP3 с MMP2.