Active Tissue Inhibitors Of Metalloproteinase 4 (TIMP4) (APA130Hu01)

Ингибитор тканевых металлопротеиназ 4 (TIMP4) - фермент, кодируемый у человека геном TIMP4, который относится к семейству генов ингибиторов металлопротеиназ. Белки этого семейства подавляют активность матриксных металлопротеиназ - группы пептидаз, участвующих в деградации внеклеточного матрикса. Секретируемый белок, содержащий домен нетрина и кодируемый данным геном, участвует в регуляции агрегации и рекрутирования тромбоцитов, а также может играть роль в гормональной регуляции и ремоделировании ткани эндометрия. Поскольку матриксная металлопротеиназа 2 (MMP2) идентифицирована как партнер взаимодействия TIMP4, для детекции связывания рекомбинантного человеческого TIMP4 с рекомбинантным человеческим MMP2 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: TIMP4 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые MMP2, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TIMP4, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее проводили инкубацию с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания TIMP4 и MMP2 представлена на рис. 1; наблюдаемый эффект носил дозозависимый характер.