Active Toll Like Receptor 2 (TLR2) (APA663Hu02)

TLR2 представляет собой трансмембранный белок I типа из семейства толл-подобных рецепторов, содержащий внеклеточные лейцин-богатые повторы (LRR) и цитоплазматический домен TIR. Человеческий TLR2 синтезируется как предшественник из 784 аминокислот, включающий сигнальный пептид (аа 1–18), внеклеточный домен (аа 19–588) с ~20 LRR, трансмембранный сегмент (аа 589–609) и цитоплазматический домен TIR (аа 610–784). Рецептор экспрессируется на моноцитах, дендритных клетках, нейтрофилах, В-клетках, эндотелиальных клетках и гепатоцитах. TLR2 функционирует в составе гетеродимерного комплекса с TLR1 или TLR6, распознавая липопротеины и гликолипиды грамположительных и грамотрицательных бактерий, микоплазм и дрожжей: гетеродимер TLR2/TLR1 связывает триацилированные липопептиды, а TLR2/TLR6 предпочтительно узнает диацилированные липопептиды. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TLR2 с рекомбинантным человеческим TLR1 проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Рекомбинантный TLR2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TLR1, и инкубировали 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали 1 ч с поликлональными антителами к TLR2, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего лунки аспирировали и промывали пятикратно. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. Реакцию останавливали добавлением 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Активность связывания TLR2 с TLR1 представлена на рис. 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило 0,21 мкг/мл.