Active Toll Like Receptor 2 (TLR2) (APA663Hu04)

TLR2 относится к семейству толл-подобных рецепторов (TLR), представляющих собой трансмембранные белки I типа с многочисленными внеклеточными лейцин-богатыми повторами (LRR) и цитоплазматическим доменом Toll/IL-1 рецептора (TIR). Человеческий TLR2 синтезируется в виде предшественника из 784 аминокислот, содержащего сигнальный пептид (остатки 1–18), внеклеточный домен (остатки 19–588) приблизительно с 20 LRR, трансмембранный сегмент (остатки 589–609) и цитоплазматический TIR-домен (остатки 610–784). Рецептор экспрессируется на различных типах клеток, включая моноциты, дендритные клетки, нейтрофилы, В-клетки, эндотелиальные клетки и гепатоциты. Стимуляция TLR2 индуцирует активацию mTORC1 через TIRAP, что необходимо для опосредованной TLR2 продукции IFN-γ. Для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого TLR2 и рекомбинантного человеческого TIRAP был проведен функциональный иммуноферментный анализ (ИФА) связывания. Кратко: TLR2 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TIRAP, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TLR2, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. Наконец, в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания TLR2 и TIRAP представлена на рис. 1; эффект носил дозозависимый характер, значение EC50 составило 0,013 мкг/мл.