Active Transglutaminase 1 (TGM1) (APB773Mu01)

Трансглутаминаза 1 (TGM1) - это фермент, экспрессируемый в клетках наружного слоя кожи (эпидермиса). Он катализирует присоединение алкильной группы от алкиламина к остатку глутамина в белке с образованием алкилглутамина. TGM1 участвует в формировании ороговевающей клеточной оболочки - структуры, окружающей клетки кожи и обеспечивающей защитный барьер между организмом и внешней средой. Поскольку альфа-синуклеин (SNCa) идентифицирован как партнер взаимодействия TGM1, для детекции связывания рекомбинантного мышиного TGM1 и рекомбинантного мышиного SNCa был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) на связывание. Кратко: TGM1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). По 100 мкл каждого разведения в двух повторностях вносили в лунки планшета, предварительно покрытые SNCa, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TGM1, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее добавляли вторичное антитело, меченное пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали лунки. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при 450 нм. Результаты, представленные на рисунке 1, демонстрируют связывание TGM1 с SNCa в дозозависимой манере.