Active Tumor Necrosis Factor Beta (TNFb) (APA134Ra02)

TNF-β, являющийся членом семейства факторов некроза опухоли, представляет собой мощный лимфоидный фактор, оказывающий цитотоксическое действие на широкий спектр опухолевых клеток. Биологические эффекты TNF-β весьма схожи с эффектами TNF-α вследствие сходства молекулярной структуры и рецепторов. Согласно литературным данным, TNF-α способен ингибировать пролиферацию и индуцировать апоптоз клеток A549; в связи с этим клетки A549 высевали в трех повторностях в лунки 96-луночных планшетов в концентрации 4000 клеток/лунку в стандартную среду DMEM с добавлением 5% сыворотки, содержащую рекомбинантный крысиный TNF-β в различных концентрациях. После 48-часовой инкубации клетки исследовали с помощью инвертированного микроскопа, а пролиферацию клеток оценивали с использованием набора CCK-8 (Cell Counting Kit-8). Кратко: в каждую лунку планшета добавляли по 10 мкл раствора CCK-8, затем после 2-часовой инкубации планшета при 37°C измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм на микропланшетном ридере. Результаты наблюдения за пролиферацией клеток A549 после 48-часовой инкубации с TNF-β с помощью инвертированного микроскопа представлены на рис. 1. Жизнеспособность клеток оценивали методом CCK-8 после 48-часовой инкубации с рекомбинантным мышиным TNF-β; результаты представлены на рис. 2. Было установлено, что TNF-β достоверно ингибирует жизнеспособность клеток A549. Значение ED50 составило 2,5 мкг/мл.

Рисунок 2. Ингибирование пролиферации клеток A549 после стимуляции фактором некроза опухоли-бета (TNF-β).