Active Tumor Protein p53 (P53) (APA928Ra01)

Белок p53 (TP53), также известный как клеточный опухолевый антиген p53, обладает множеством механизмов противоопухолевой активности, участвуя в апоптозе, поддержании геномной стабильности и ингибировании ангиогенеза. Выполняя функцию супрессора опухолей при различных типах новообразований, TP53 индуцирует остановку роста или апоптоз в зависимости от физиологических условий и типа клеток. Кроме того, TP53 участвует в регуляции клеточного цикла как транс-активатор, осуществляющий негативную регуляцию клеточного деления посредством контроля экспрессии ряда необходимых для этого процесса генов. Поскольку было установлено, что CREB-связывающий белок (CREBBP) взаимодействует с TP53, был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного крысиного TP53 и рекомбинантного крысиного CREBBP. Кратко: TP53 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые CREBBP, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к TP53, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), после чего снова удаляли раствор и трехкратно промывали. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длине волны 450 нм. Активность связывания TP53 и CREBBP представлена на рисунке 1; данный эффект носил дозозависимый характер. Активность связывания TP53 с CREBBP.