Active V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC) (APB290Hu01)

Белок MYC (продукт протоонкогена c-myc) представляет собой ядерный фосфопротеин, связывающийся со специфическими последовательностями ДНК. MYC функционирует как фактор транскрипции, регулирующий экспрессию генов-мишеней. Доказано, что внутриклеточно белок c-Myc ассоциирован с TBP (TATA-связывающим белком), входящим в состав инициирующего транскрипцию комплекса TFIID; кроме того, считается, что белок TRRAP (белок, ассоциированный с доменом трансформации/транскрипции) является важным кофактором для MYC. В связи с этим был проведен иммуноферментный анализ (ELISA) для детекции взаимодействия MYC с TBP и TRRAP. Кратко: рекомбинантный человеческий MYC серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые TBP и TRRAP, и инкубировали в течение 2 ч при 37°C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к MYC, после чего содержимое удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), лунки снова опорожняли и трехкратно промывали. Затем добавляли субстратный раствор и инкубировали лунки в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно измеряли оптическую плотность при длине волны 450 нм. Активность связывания MYC с TBP и TRRAP представлена на рисунках 1 и 2 соответственно; данный эффект носил дозозависимый характер.