Active VGF Nerve Growth Factor Inducible (VGF) (APB166Hu01)

Нейросекреторный белок VGF специфически экспрессируется в субпопуляции нейроэндокринных клеток и регулируется в сторону повышения фактором роста нервов. Предшественник человеческого VGF состоит из 615 аминокислот (а.о.), включая сигнальный пептид длиной 22 а.о. и зрелый регион длиной 593 а.о. Структурная организация данного гена аналогична таковой у крысы, причем как транслируемые, так и нетранслируемые области демонстрируют высокую степень гомологии последовательностей с геном крысы. Кодируемый секреторный белок также обладает сходством с семейством секретогранинов/хромогранинов, однако его точная функция остается неизвестной. Кроме того, белок раннего ответа 1 (EGR1) был идентифицирован как партнер взаимодействия VGF, в связи с чем был проведен иммуноферментный анализ (ИФА) связывания для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого VGF и рекомбинантного человеческого EGR1. Кратко: EGR1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые VGF, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBS с Tween 20 (PBST) и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к EGR1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания VGF и EGR1 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,60912 мкг/мл.