Active VGF Nerve Growth Factor Inducible (VGF) (APB166Hu61)

Нейросекреторный белок VGF специфически экспрессируется в субпопуляции нейроэндокринных клеток и регулируется фактором роста нервов. Предшественник человеческого VGF состоит из 615 аминокислот (а.о.), включая сигнальный пептид длиной 22 а.о. и зрелый регион длиной 593 а.о. Структурная организация гена аналогична таковой у крысы, при этом как транслируемые, так и нетранслируемые области демонстрируют высокую степень гомологии последовательностей. Кодированный секреторный белок также обладает сходством с семейством секретогранинов/хромогранинов, однако его точная функция неизвестна. Поскольку белок раннего ответа 1 (EGR1) был идентифицирован как партнер взаимодействия VGF, для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого VGF и рекомбинантного человеческого EGR1 был проведен иммуноферментный анализ связывания. Кратко: EGR1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые VGF, и инкубировали в течение 1 ч при 37°C. Лунки промывали PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к EGR1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37°C, раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37°C. Наконец, в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания VGF и EGR1 представлена на рис. 1; значение EC50 для данного эффекта составило 0,11066 мкг/мл.