Active VGF Nerve Growth Factor Inducible (VGF) (APB166Mu01)

Нейросекреторный белок VGF, специфически экспрессируемый в субпопуляции нейроэндокринных клеток и регулируемый фактором роста нервов, обладает гомологией с семейством секретогранинов/хромогранинов, однако его точная функция остается неизвестной. Поскольку белок раннего ответа EGR1 был идентифицирован как партнер взаимодействия VGF, для детекции связывания рекомбинантного мышиного VGF и рекомбинантного мышиного EGR1 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Вкратце, EGR1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА, pH 7,4). Дубликаты проб объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые VGF, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После промывки буфером PBST лунки инкубировали с поликлональными антителами к EGR1 в течение 1 ч, затем раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее следовала инкубация с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего раствор удаляли и выполняли пятикратную промывку. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при длинах волн 450/630 нм. Активность связывания VGF и EGR1 представлена на рисунке 1; значение ED50 для данного эффекта составило 0,473 мкг/мл.