Active VGF Nerve Growth Factor Inducible (VGF) (APB166Mu61)

Нейросекреторный белок VGF, специфически экспрессируемый в субпопуляции нейроэндокринных клеток и регулируемый фактором роста нервов, обладает сходством с семейством секретогранинов/хромогранинов, однако его точная функция неизвестна. Поскольку белок раннего ответа 1 (EGR1) был идентифицирован как партнер взаимодействия VGF, для детекции связывания рекомбинантного мышиного VGF и рекомбинантного мышиного EGR1 был проведен иммуноферментный анализ (ИФА). Кратко: EGR1 серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% БСА (pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки микропланшета, покрытые VGF, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. Лунки промывали буфером PBST и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к EGR1, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Далее лунки инкубировали с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), в течение 1 ч при 37 °C, после чего раствор удаляли и проводили пятикратную промывку. После добавления субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450/630 нм. Активность связывания VGF и EGR1 представлена на рис. 1; значение ED50 для данного эффекта составило 0,515 мкг/мл.