Active Vitamin D Receptor (VDR) (APA475Hu01)

Рецептор витамина D (VDR) представляет собой ядерный гормональный рецептор к витамину D3, относящийся к семейству транскрипционных регуляторных факторов и обладающий гомологией последовательности с рецепторами стероидных и тиреоидных гормонов. VDR опосредует действие витамина D3 посредством контроля экспрессии гормон-чувствительных генов. Поскольку альфа-рецептор ретиноевой кислоты (RXRα) идентифицирован как партнер взаимодействия VDR, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного человеческого VDR и рекомбинантного человеческого RXRα. Кратко: VDR серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с добавлением 0,01% бычьего сывороточного альбумина (БСА), pH 7,4. Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые RXRα, и инкубировали в течение 1 ч при 37 °C. После удаления содержимого лунок проводили инкубацию с поликлональными антителами к VDR в течение 1 ч, затем снова удаляли раствор и промывали лунки 3 раза. После инкубации с вторичными антителами, меченными пероксидазой хрена (HRP), лунки промывали 5 раз. Добавляли субстратный раствор и инкубировали 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания VDR и RXRα представлена на рисунке 1; эффект носил дозозависимый характер. Значение EC50 составило 0,469 мкг/мл.