Active Vitronectin (VTN) (APB041Ra01)

Витронектин (VTN) - гликопротеин семейства гемолексинов, обильно присутствующий в сыворотке крови, внеклеточном матриксе и костной ткани. Это секретируемый белок, существующий в одноцепочечной форме или в виде двухцепочечной формы с разрывом цепи, удерживаемой дисульфидной связью. VTN связывается с интегрином альфа-V бета-3, способствуя адгезии и распластыванию клеток, а также взаимодействует с ингибитором активатора плазминогена-1 (PAI-1), регулируя протеолиз, инициируемый активацией плазминогена. Поскольку белок 5, связывающий инсулиноподобный фактор роста (IGFBP5), идентифицирован как партнер взаимодействия VTN, был проведен связывающий иммуноферментный анализ (ИФА) для детекции взаимодействия рекомбинантного VTN крысы и рекомбинантного IGFBP5 крысы. Кратко: VTN серийно разводили в фосфатно-солевом буфере (PBS) с 0,01% бычьим сывороточным альбумином (БСА, pH 7,4). Дубликатные пробы объемом 100 мкл вносили в лунки планшета, покрытые IGFBP5, и инкубировали в течение 2 ч при 37 °C. Лунки промывали PBS с Tween 20 (PBST) и инкубировали в течение 1 ч с поликлональными антителами к VTN, после чего раствор удаляли и проводили трехкратную промывку. Затем добавляли вторичные антитела, меченные пероксидазой хрена (HRP), удаляли раствор и снова промывали лунки три раза. После внесения субстратного раствора лунки инкубировали в течение 15–25 мин при 37 °C. В завершение в лунки добавляли по 50 мкл стоп-раствора и немедленно проводили измерение оптической плотности при 450 нм. Активность связывания VTN и IGFBP5 представлена на рис. 1; данный эффект носил дозозависимый характер.