Acetyl-Histone H3-K14 Rabbit mAb (A27265)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к ацетилированному гистону H3 (по лизину 14) (A27265) в разведении 1:11 000. Инкубацию проводили в течение ночи при температуре 4 °C. Клетки C6 предварительно обрабатывали трихостатином А (TSA) в концентрации 1 мкМ при 37 °C в течение 18 часов. В качестве вторичных антител использовали козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 45 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием моноклонального кроличьего антитела к ацетилированному гистону H3 (лизин 14) (A27265) в разведении 1:11 000 (инкубация в течение ночи при 4 °C). Клетки HeLa предварительно обрабатывали трихостатином А (TSA) в концентрации 1 мкМ при 37 °C в течение 18 часов. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 5 с.

Иммунопреципитацию хроматина (ChIP) проводили с использованием 10 мкг сшитого хроматина, выделенного из клеток линии HeLa. Для иммунопреципитации применяли 3 мкг моноклонального кроличьего антитела к ацетилированному гистону H3 по лизину 14 (Acetyl-Histone H3-K14, A27265) или изотипического контроля кроличьего IgG (AC042). Обогащение иммунопреципитированной ДНК в различных локусах генома оценивали методом количественной ПЦР (qPCR). На гистограмме представлено соотношение количества иммунопреципитированной ДНК к количеству входной ДНК (input) для указанных локусов.