Acetyl-Histone H4-K8 Rabbit mAb (A26921)

Иммунопреципитацию ацетилированного гистона H4 по лизину 8 (Ac-H4K8) проводили из 600 мкг экстрактов клеток линии HeLa, обработанных трихостатином А (TSA, 1 мкМ, 18 ч), с использованием 2 мкг моноклонального кроличьего антитела к Ac-H4K8 (A26921). В качестве контроля использовали изотипическое кроличье IgG (AC042). Элюцию образцов после иммунопреципитации осуществляли в буфере Лэммли (1×). Дорожка «Input» соответствовала 10% от общего количества белка. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением того же моноклонального кроличьего антитела к Ac-H4K8 (A26921) в разведении 1:5000.

Иммунопреципитацию хроматина (ChIP) проводили с использованием 10 мкг сшитого хроматина, выделенного из клеток линии HeLa. Для иммунопреципитации применяли 3 мкг моноклонального кроличьего антитела к ацетилированному гистону H4 (лизин 8) (A26921) или изотипического контроля кроличьего IgG (AC042). Обогащение иммунопреципитированной ДНК в различных локусах генома оценивали методом количественной ПЦР (qPCR). На гистограмме представлено соотношение количества иммунопреципитированной ДНК к количеству входной ДНК (input) для указанных локусов.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием моноклонального кроличьего антитела к ацетилированному гистону H4 (лизин 8) (A26921) в разведении 1:12 000 (инкубация проводилась в течение ночи при 4 °C). Клетки HeLa предварительно обрабатывали трихостатином А (TSA) в концентрации 1 мкМ при 37 °C в течение 18 часов. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составила 30 мкг на лунку. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 5 с.