CCL4/MIP-1 beta Rabbit mAb (A27580)

Проведено конфокальное микроскопирование клеток RAW 264.7, обработанных ЛПС и БФА, а также необработанных клеток. Окрашивание выполняли с использованием моноклонального кроличьего антитела к CCL4/MIP-1 бета (A27580, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.

Проведено конфокальное визуализирование клеток THP-1, обработанных комбинацией форбол-12-миристат-13-ацетата (PMA), липополисахарида (LPS) и брефельдина А (BFA), а также необработанных клеток. Окрашивание выполняли с использованием моноклонального кроличьего антитела к CCL4/MIP-1β (A27580, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими поликлональными антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с флуорофором Cy3 (AS007, разведение 1:500; красная флуоресценция). Ядра клеток контрастировали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100×.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток THP-1 с использованием моноклонального кроличьего антитела к CCL4/MIP-1 beta (A27580) в разведении 1:11 000. Инкубацию первичного антитела осуществляли при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Клетки THP-1 предварительно обрабатывали форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA/TPA, 80 нМ) при 37 °C в течение ночи, а затем липополисахаридом (LPS, 1 мкг/мл) и брефельдином А (BFA, 300 нг/мл) в течение 8 часов. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.