CD16b Rabbit mAb (A25539)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток дикого типа (WT) и клеток линии 293F, трансфицированных геном CD16b. Использовано моноклональное кроличье антитело к CD16b (A25539) в разведении 1:4000. В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка белка составила 25 мкг на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 180 с.

Клетки 293T (отрицательный контроль, слева) и трансфицированные клетки 293F (справа) в количестве 1×10⁶ были окрашены по поверхностным антигенам с использованием моноклонального кроличьего антитела к CD16b (A25539, 2 мкг/мл, оранжевая линия) или изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, синяя линия), после чего проводили окрашивание поликлональным козьим антителом против IgG кролика, конъюгированным с Alexa Fluor® 647. В качестве холостого контроля («blank control») использовали клетки, не окрашенные флуоресцентными красителями (красная линия).

Клетки 293F (после трансфекции) в количестве 1×10^6 были окрашены по поверхностному типу с использованием изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, слева) или моноклонального кроличьего антитела к CD16b (A25539, 2 мкг/мл, справа), после чего проводили окрашивание поликлональным козьим антителом против IgG кролика, конъюгированным с Alexa Fluor® 647.