CD8β Rabbit mAb (A24827)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток дикого типа (WT) и клеток линии 293T, трансфицированных геном CD8β. Использовано моноклональное кроличье антитело к CD8β (A24827) в разведении 1:80 000. В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 20 с.

Клетки 293F (отрицательный контроль, слева) и трансфицированные клетки 293F (справа) в количестве 1×10⁶ были окрашены по поверхности с использованием моноклонального кроличьего антитела к CD8β (A24827, 2 мкг/мл, оранжевая линия) или изотипического контроля ABflo® 647 Rabbit IgG (A22070, 5 мкл/тест, синяя линия), после чего проводили окрашивание поликлональным козьим антителом против IgG кролика, конъюгированным с Alexa Fluor® 647. В качестве холостого контроля («blank control») использовали клетки, не окрашенные флуоресцентными красителями (красная линия).

Клетки 293F (после трансфекции) в количестве 1×10^6 были окрашены по поверхностному типу с использованием изотипического контроля ABflo® 647 Rabbit IgG (A22070, 5 мкл/пробу, слева) или моноклонального кроличьего антитела к CD8β (A24827, 2 мкг/мл, справа).