CD99 Rabbit mAb (A25856)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии Hep G2 с использованием моноклонального кроличьего антитела к CD99 (A25856) в разведении 1:2000 при инкубации в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 30 с.

Клетки U266 (отрицательный контроль, слева) и Jurkat (справа) в количестве 1×10⁶ были окрашены на поверхности с использованием моноклонального кроличьего антитела к CD99 (A25856, 2 мкг/мл, оранжевая линия) или изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, синяя линия), после чего проводили окрашивание поликлональным антителом осла против IgG кролика, конъюгированным с фикоэритрином (PE). В качестве отрицательного контроля («blank control») использовали клетки, не окрашенные флуоресцентными красителями (красная линия).

Клетки Jurkat в количестве 1×10^6 были окрашены на поверхности с использованием изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, слева) или моноклонального кроличьего антитела к CD99 (A25856, 2 мкг/мл, справа), после чего проводили окрашивание поликлональным антителом осла к IgG кролика, конъюгированным с фикоэритрином (PE).