IFN-gamma Rabbit mAb (A25684)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга активного рекомбинантного человеческого белка IFN-gamma (RP01038). Образцы белков (0,1–10 нг на дорожку) инкубировали с моноклональным кроличьим антителом к IFN-gamma (A25684) в разведении 1:1000 в течение ночи при 4°C. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.

Клетки 293T (отрицательный контроль, слева) и трансфицированные клетки 293T (справа) в количестве 1×10⁶ были подвергнуты внутриклеточному окрашиванию с использованием моноклонального кроличьего антитела к IFN-γ (A25684, 2 мкг/мл, оранжевая линия) или изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, синяя линия), после чего проводили окрашивание поликлональным козьим антителом против IgG кролика, конъюгированным с Alexa Fluor® 647. В качестве холостого контроля («blank control») использовали клетки, не окрашенные флуоресцентными красителями (красная линия).

Трансфицированные клетки линии 293T в количестве 1×10^6 были подвергнуты внутриклеточному окрашиванию с использованием изотипического контроля кроличьего IgG (AC042, 2 мкг/мл, левая гистограмма) или моноклонального кроличьего антитела к IFN-γ (A25684, 2 мкг/мл, правая гистограмма). Детекцию проводили с помощью поликлонального козьего антитела против IgG кролика, конъюгированного с Alexa Fluor® 647.