IFN-gamma Rabbit mAb (A27845)

Проведено конфокальное микроскопирование клеток линии NK-92, обработанных ТПА и иономицином, а также необработанных клеток. Образцы окрашивали моноклональным кроличьим антителом к IFN-γ (A27845, разведение 1:300), после чего инкубировали с козьими антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красная флуоресценция). Ядра клеток контрастировали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100×.

Иммунопреципитацию IFN-гамма из 600 мкг экстрактов клеток NK-92, обработанных ТПА (80 нМ) и иономицином (3 мкМ) в течение 4 часов, проводили с использованием 0,5 мкг моноклонального кроличьего антитела к IFN-гамма (A27845). В качестве контроля для преципитации использовали изотипический контроль кроличьего IgG (AC005). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстанавливающим буфером Лэммли (1×). Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением моноклонального кроличьего антитела к IFN-гамма (A27845) в разведении 1:2000.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии NK-92 с использованием кроличьего моноклонального антитела к IFN-гамма (A27845) в разведении 1:5000 (инкубация в течение ночи при 4°C). Клетки NK-92 подвергали обработке ТПА (80 нМ) и иономицином (3 мкМ) при 37°C в течение 4 часов после ночной инкубации в среде без сыворотки. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.