IL-6 Rabbit mAb (A27935)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных клеточных лизатов с использованием моноклонального кроличьего антитела к IL-6 (A27935) в разведении 1:5000 при инкубации в течение ночи при 4°C. Клеточные линии RAW 264.7 и NR8383 предварительно обрабатывали липополисахаридом (ЛПС, 1 мкг/мл) и брефельдином А (БФА, 300 нг/мл) в течение 8 часов. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. На дорожку гель-электрофореза наносили 30 мкг белка. Блокирование неспецифического связывания осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 45 с.

Иммунопреципитацию IL-6 из 1000 мкг экстрактов клеток NR8383, обработанных ЛПС (100 нг/мл, 24 ч) и БФА (1 мкг/мл, 6 ч), проводили с использованием 1 мкг моноклонального кроличьего антитела к IL-6 (A27935). В качестве контроля для иммунопреципитации использовали кроличий контрольный IgG (AC005). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстановленным буфером Лэммли (1x). Дорожка «Input» соответствует 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением моноклонального кроличьего антитела к IL-6 (A27935) в разведении 1:10 000.

Проведено конфокальное микроскопирование клеток RAW 264.7, обработанных липополисахаридом (ЛПС) и брефельдином А (БФА), а также необработанных клеток. Образцы окрашивали моноклональным кроличьим антителом к ИЛ-6 (A27935, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими анти-кроличьими антителами против тяжелых и легких цепей IgG (H+L), конъюгированными с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красная флуоресценция). Ядра клеток контрастировали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100x.