iNOS Rabbit mAb (A28530)

Проведен анализ методом вестерн-блот различных клеточных лизатов с использованием моноклонального кроличьего антитела к iNOS (A28530) в разведении 1:5000 (инкубация проводилась в течение ночи при 4°C). Клетки линии DLD-1 предварительно обрабатывали человеческим интерфероном-γ (hIFN-γ, 300 нг/мл), человеческим интерлейкином-1β (hIL-1β, 5 нг/мл) и человеческим фактором некроза опухоли-α (hTNF-α, 30 нг/мл) при 37°C в течение 24 часов. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку вносили 30 мкг общего белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 90 с.

Проведено конфокальное микроскопирование клеток RAW 264.7, обработанных ЛПС, и необработанных клеток с использованием моноклонального кроличьего антитела к iNOS (A28530, разведение 1:200). Вторичное окрашивание выполняли с применением козьих антител против IgG кролика (H+L), конъюгированных с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Ядра клеток контрастировали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.

Проведено конфокальное микроскопирование клеток линии C6, обработанных рекомбинантными человеческими цитокинами (hIFN-γ, hIL-1β и hTNF-α), а также необработанных клеток контроля. Окрашивание выполняли с использованием моноклонального кроличьего антитела к iNOS (A28530, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с флуорофором Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красная флуоресценция). Ядра клеток контрастировали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100x.