[KD Validated] CCNT1 Rabbit mAb (A28002)

Иммунопреципитацию CCNT1 из 300 мкг экстракта клеток HeLa проводили с использованием 1 мкг моноклонального кроличьего антитела к CCNT1 (A28002, валидированного методом нокаута гена). В качестве контроля для иммунопреципитации использовали кроличий контрольный IgG (AC005). Образцы после иммунопреципитации элюировали буфером Лэммли (1×). Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением моноклонального кроличьего антитела к CCNT1 (A28002) в разведении 1:5000.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена CCNT1 (KD). Мембраны инкубировали с кроличьим моноклональным антителом к CCNT1 (валидировано для нокаута, артикул A28002) в разведении 1:5000 в течение ночи при 4°C. В качестве вторичного антитела использовали козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. На дорожку наносили 25 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 20 с.

Проведено конфокальное микроскопирование клеток линии HeLa с использованием валидированного методом нокдауна (KD) моноклонального кроличьего антитела к CCNT1 (A28002, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьим анти-кроличьим IgG (H+L), конъюгированным с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим анти-мышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.