[KD Validated] CD46 Rabbit mAb (A25553)

Клетки HeLa с подавленной экспрессией (knockdown, KD; низкий уровень экспрессии, слева) и клетки HeLa дикого типа (справа) в количестве 1×10^6 были окрашены на поверхности с использованием валидированного для нокаута моноклонального кроличьего антитела к CD46 (A25553, 2 мкг/мл, оранжевая линия) или изотипического контроля ABflo® 647 Rabbit IgG (A22070, 5 мкл/пробу, синяя линия), после чего проводили окрашивание поликлональным козьим антителом против IgG кролика, конъюгированным с Alexa Fluor® 647. В качестве отрицательного контроля («blank control») использовали клетки, не окрашенные флуоресцентными красителями (красная линия).

Клетки HeLa в количестве 1×10^6 были окрашены по поверхностному типу с использованием изотипического контроля ABflo® 647 Rabbit IgG (A22070, 5 мкл/пробу, слева) или валидированного методом нокаута гена (KD) моноклонального кроличьего антитела к CD46 (A25553, 2 мкг/мл, справа).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокдауном гена CD46 (KD). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Инкубацию с первичным моноклональным кроличьим антителом к CD46 (валидировано для нокдауна, артикул A25553) проводили в разведении 1:1000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (артикул AS014) в разведении 1:10000. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 90 с.