[KD Validated] METTL14 Rabbit mAb (A24396)

Иммунопреципитацию METTL14 проводили из 300 мкг экстракта клеток линии Raji с использованием 3 мкг моноклонального кроличьего антитела к METTL14 (A24396). В качестве контроля использовали изотипическое кроличье IgG (AC042). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстанавливающим буфером Лэммли (1×). Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением моноклонального кроличьего антитела к METTL14 (A24396) в разведении 1:500.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных клеточных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к METTL14 (валидировано методом нокаута гена, артикул A24396) в разведении 1:47 000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4 °C. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 25 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 45 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокдауном гена METTL14 (KD). Мембраны инкубировали с кроличьим моноклональным антителом к METTL14 (валидировано для нокдауна, артикул A24396) в разведении 1:47 000 в течение ночи при температуре 4 °C. В качестве вторичного антитела использовали козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. На дорожку вносили по 25 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.