[KD Validated] NNMT Rabbit mAb (A25391)

Иммунопреципитацию белка NNMT проводили из 200 мкг экстракта клеток линии A549 с использованием 0,5 мкг моноклонального кроличьего антитела к NNMT (A25391), валидированного методом нокаута гена (KD). Анализ методом вестерн-блоттинга выполняли с применением того же антитела (A25391) в разведении 1:3000.

Клетки A549 визуализировали методом конфокальной микроскопии с использованием валидированного моноклонального кроличьего антитела к NNMT (A25391, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьим анти-кроличьим IgG (H+L), конъюгированным с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим анти-мышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена NNMT (KD) с использованием кроличьего моноклонального антитела к NNMT (валидировано для нокаута, артикул A25391) в разведении 1:3000. В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP, артикул AS014), в разведении 1:10000. На дорожку наносили 25 мкг белка. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 30 с.