[KD Validated] RIPK1/RIP Rabbit mAb (A19580)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных клеточных лизатов с использованием валидированного методом нокаута гена (KD validated) моноклонального кроличьего антитела к RIPK1/RIP (A19580) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 25 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 3 минуты.

Иммунопреципитацию белка RIPK1/RIP проводили из 300 мкг экстракта клеток HeLa с использованием 3 мкг моноклонального кроличьего антитела к RIPK1/RIP (A19580, валидировано методом нокаута гена). В качестве контроля использовали изотипическое кроличье IgG (AC042). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстановленным буфером Лэммли (1x). Дорожка «Input» соответствует 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением того же моноклонального кроличьего антитела к RIPK1/RIP (A19580) в разведении 1:500.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T дикого типа (WT) и клеток с нокдауном RIPK1/RIP (KD). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Инкубацию проводили с кроличьим моноклональным антителом к RIPK1/RIP (валидировано для нокдауна, артикул A19580) в разведении 1:1000 при комнатной температуре в течение 1,5 часов. В качестве вторичных антител использовали козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP, артикул AS014), в разведении 1:10000. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.