[KD Validated] TRIM25 Rabbit mAb (A25846)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T дикого типа (WT) и клеток с нокдауном гена TRIM25 (KD). Образцы нагружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с применением кроличьего моноклонального антитела к TRIM25 (валидировано для нокдауна, артикул A25846) в разведении 1:4700 (инкубация в течение ночи при 4°C) и вторичного антитела — козьего антикроличьего IgG (H+L), конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Визуализацию выполняли с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 2 с.

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов ткани толстой кишки человека с использованием валидированного методом нокдауна (KD) моноклонального кроличьего антитела к TRIM25 (A25846) в разведении 1:300 (увеличение объектива 40x). Перед окрашиванием выполнена высокотемпературная демаскировка антигенов в цитратном буфере (0,01 М, pH 6,0).

Клетки HeLa были проанализированы методом конфокальной микроскопии с использованием валидированного методом нокдауна (KD) кроличьего моноклонального антитела к TRIM25 (A25846, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьим анти-кроличьим IgG (H+L), конъюгированным с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли мышиное моноклональное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим анти-мышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.