[KO Validated] ATF3 Rabbit mAb (A28345)

Иммунопреципитацию ATF3 проводили из 300 мкг экстрактов клеток линии 293T с использованием 2 мкг моноклонального кроличьего антитела к ATF3 (A28345, валидировано на нокауте). В качестве контроля для преципитации использовали кроличий контрольный IgG (AC005). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстанавливающим буфером Лэммли (1×). Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного материала. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением того же моноклонального кроличьего антитела к ATF3 (A28345, валидировано на нокауте) в разведении 1:5000.

Иммунопреципитацию хроматина (ChIP) проводили с использованием 15 мкг сшитого хроматина, полученного из клеток линии 293T. В качестве первичных антител применяли моноклональное кроличье антитело к ATF3 (валидировано методом нокаута, артикул A28345, 5 мкг) и изотипический контроль кроличьего IgG (AC042). Обогащение иммунопреципитированной ДНК на различных геномных локусах оценивали методом количественной ПЦР (qPCR). На гистограмме представлено соотношение количества иммунопреципитированной ДНК к количеству входной ДНК (input) для указанных локусов.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена ATF3 (KO). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Инкубацию с первичным моноклональным кроличьим антителом к ATF3 (валидировано для нокаута, артикул A28345) проводили в разведении 1:5000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 90 с.