[KO Validated] Caspase-9 Rabbit mAb (A18676)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена Caspase-9 (KO). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Мембраны инкубировали с первичным моноклональным кроличьим антителом к Caspase-9 (валидировано для нокаута, артикул A18676) в разведении 1:10 000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Детекцию проводили с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 90 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов мозга мыши с использованием моноклонального кроличьего антитела к каспазе-9 (валидировано на нокауте, A18676) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 25 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 30 с.

Клетки NIH/3T3 анализировали методом конфокальной микроскопии с использованием валидированного на нокауте (KO Validated) моноклонального кроличьего антитела к каспазе-9 (A18676, разведение 1:200). Детекцию проводили с помощью конъюгированного с Cy3 козьего антитела против IgG кролика (H+L) (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контр-окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с конъюгированным с ABflo® 488 козьим антителом против IgG мыши (H+L) (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.