[KO Validated] CDKN1A/p21CIP1 Rabbit mAb (A27846)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к CDKN1A/p21CIP1 (валидировано на нокауте, A27846) в разведении 1:5000. Инкубацию первичного антитела осуществляли при комнатной температуре в течение 1,5 часов. В качестве вторичного антитела применяли козье анти-кроличье IgG (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка белка составляла 25 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 90 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии 293T дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена CDKN1A/p21CIP1 (KO). Образцы были инкубированы с валидированным на нокаутных клетках моноклональным кроличьим антителом к CDKN1A/p21CIP1 (A27846) в разведении 1:5000 при комнатной температуре в течение 1,5 ч. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 25 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 90 с.

Клетки NIH/3T3 подвергли конфокальной визуализации с использованием валидированного на нокауте (KO Validated) моноклонального кроличьего антитела к CDKN1A/p21CIP1 (A27846, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьим анти-кроличьим IgG (H+L), конъюгированным с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим анти-мышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.