[KO Validated] DHODH Rabbit mAb (A28565)

Клетки NIH/3T3 были проанализированы методом конфокальной микроскопии с использованием валидированного на нокауте (KO Validated) моноклонального кроличьего антитела к DHODH (A28565, разведение 1:200). Детекцию проводили с помощью козьего анти-кроличьего IgG (H+L), конъюгированного с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим анти-мышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к DHODH (валидировано на нокауте, A28565) в разведении 1:5000 (инкубация в течение ночи при 4°C). В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 45 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена DHODH (KO). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Инкубацию проводили с первичным моноклональным кроличьим антителом к DHODH (валидировано для нокаута, артикул A28565) в разведении 1:5000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020) при времени экспозиции 90 с.