[KO Validated] HMGB1 Rabbit mAb (A19529)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием кроличьего моноклонального антитела к HMGB1 с валидацией на нокауте ([KO Validated] HMGB1 Rabbit mAb, артикул A19529) в разведении 1:6000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 0,5 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена HMGB1 (KO). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Мембраны инкубировали с первичным моноклональным кроличьим антителом к HMGB1 (валидировано на нокауте, артикул A19529) в разведении 1:6000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Детекцию проводили с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 0,5 с.

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов клеток HeLa и клеток HeLa с нокаутом гена HMGB1 (HeLa-HBMG1-KO) с использованием валидированного на нокауте моноклонального кроличьего антитела к HMGB1 (A19529) в разведении 1:20 000 (увеличение объектива 40x). Перед окрашиванием выполнена высокотемпературная демаскировка антигенов в буфере Tris-EDTA (0,01 М, pH 9,0).