[KO Validated] NRF2 Rabbit mAb (A3577)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена NRF2 (KO) с использованием моноклонального кроличьего антитела к NRF2 (A3577, валидировано для нокаута), разведенного 1:1000. В качестве вторичного антитела применяли козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. На дорожку наносили 25 мкг белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции составило 60 с.

Хроматин-иммунопреципитацию проводили на сшитом хроматине, выделенном из клеток линии HepG2, с использованием моноклонального кроличьего антитела к Nrf2 (A3577) и кроличьего IgG (AC042) в качестве контроля. Количество иммунопреципитированной ДНК оценивали методом количественной ПЦР. На гистограмме представлено соотношение количества иммунопреципитированной ДНК к количеству входной ДНК (input).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к NRF2 (валидировано на нокауте, артикул A3577) в разведении 1:1000. Инкубацию первичных антител осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C6 предварительно обрабатывали ингибитором протеасом MG132 (10 мкМ) при 37°C в течение 90 минут. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (артикул AS014) в разведении 1:10000. На дорожку гель-электрофореза наносили 30 мкг белка. Блокирование неспецифического связывания проводили с использованием 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (артикул RM00020), время экспозиции составило 90 с.