[KO Validated] PDLIM5 Rabbit mAb (A28344)

Иммунопреципитацию белка PDLIM5 из 300 мкг экстракта клеток HeLa проводили с использованием 2 мкг моноклонального кроличьего антитела к PDLIM5, валидированного на нокаут-клетках ([KO Validated] PDLIM5 Rabbit mAb, артикул A28344). В качестве контроля использовали нормальные кроличьи IgG (AC005). Образцы после иммунопреципитации элюировали восстанавливающим буфером Лэммли (1×). Дорожка «Input» представляла 10% от общего количества исходного экстракта. Вестерн-блоттинг иммунопреципитатов выполняли с применением того же антитела (A28344) в разведении 1:5000.

Проведен иммуногистохимический анализ парафиновых срезов ткани скелетных мышц человека с использованием валидированного на нокауте (KO Validated) моноклонального кроличьего антитела к PDLIM5 (A28344) в разведении 1:500 (увеличение объектива 40x). Перед окрашиванием выполнена высокотемпературная демаскировка антигенов в буфере Tris-EDTA (0,01 М, pH 9,0).

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa дикого типа (WT) и клеток с нокаутом гена PDLIM5 (KO). Образцы загружали по 25 мкг белка на дорожку. Блокирование осуществляли с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Мембраны инкубировали с первичным моноклональным кроличьим антителом к PDLIM5 (валидировано на нокауте, артикул A28344) в разведении 1:10 000 в течение ночи при температуре 4°C. В качестве вторичного антитела использовали козье антитело против IgG кролика (H+L), конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10 000. Детекцию проводили с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 10 с.