NPY Rabbit mAb (A27192)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии SH-SY5Y с использованием кроличьего моноклонального антитела к NPY (A27192) в разведении 1:1000. Инкубацию первичного антитела осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки SH-SY5Y предварительно подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали форбол-12-миристат-13-ацетатом (PMA/TPA) в концентрации 200 нМ при 37°C в течение 15 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование неспецифического связывания проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 30 секунд.

Проведено конфокальное микроскопирование замороженных срезов ткани мозга мыши с использованием моноклонального кроличьего антитела к NPY (A27192, разведение 1:500). Детекцию осуществляли с помощью козьих антител против IgG кролика (H+L), конъюгированных с Cy3 (AS007, разведение 1:500, красный сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Перед иммунофлуоресцентным окрашиванием проводили микроволновую антигенную ретривацию в 0,01 М цитратном буфере (pH 6,0). Увеличение объектива: 40x.

Проведено конфокальное микроскопирование замороженных срезов ткани мозга крысы с использованием моноклонального кроличьего антитела к NPY (A27192, разведение 1:500). Детекцию осуществляли с помощью козьих антител против IgG кролика (H+L), конъюгированных с Cy3 (AS007, разведение 1:500, красный сигнал). Ядра окрашивали DAPI (синий сигнал). Перед иммунофлуоресцентным окрашиванием проводили микроволновую антигенную ретривацию в 0,01 М цитратном буфере (pH 6,0). Увеличение объектива: 40x.