Pan Phospho-Tyrosine Rabbit mAb (AP1316)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга различных лизатов с использованием моноклонального кроличьего антитела к пан-фосфотирозину (Pan Phospho-Tyrosine Rabbit mAb, AP1316) в разведении 1:2000. Клетки линии Jurkat обрабатывали перванадатом (1 мМ) при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 90 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 с использованием кроличьего моноклонального антитела к пан-фосфотирозину (AP1316) в разведении 1:2000. Клетки NIH/3T3 предварительно обрабатывали периванадатом (1 мМ) при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител применяли козьи антитела против IgG кролика (H+L), конъюгированные с пероксидазой хрена (AS014), в разведении 1:10000. Нагрузка составляла 25 мкг белка на дорожку. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 90 с.

Проведен анализ иммунопреципитации 300 мкг экстрактов клеток линии Jurkat, обработанных периванадатом, с использованием 3 мкг пан-антител к фосфотирозину (AP1316). Вестерн-блоттинг иммунопреципитата выполняли с применением тех же пан-антител к фосфотирозину (AP1316) в разведении 1:5000.