Phospho38 MAPK-T180/Y182 Rabbit pAb (AP0297)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием поликлонального антитела к фосфорилированному MAPK14 (Thr180/Tyr182) (AP0297, разведение 1:2000) или антитела к MAPK14 (A14401). Клетки HeLa предварительно обрабатывали TNF-α (20 нг/мл) при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014, разведение 1:10 000). Нагрузка белка составляла 25 мкг на лунку. Блокирование проводили с использованием 3% раствора бычьего сывороточного альбумина (БСА). Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020). Время экспозиции — 1 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному p38 MAPK (по остаткам Thr180/Tyr182) (AP0297) в разведении 1:1000. Инкубацию с первичным антителом проводили в течение ночи при температуре 4°C. Клетки NIH/3T3 предварительно подвергали воздействию УФ-излучения при комнатной температуре в течение 15–30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. Нагрузка белка составляла 30 мкг на дорожку. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции — 90 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием поликлонального кроличьего антитела к фосфорилированному p38 MAPK (по остаткам Thr180/Tyr182) (AP0297) в разведении 1:1000. Инкубацию проводили в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C6 предварительно подвергали воздействию УФ-излучения при комнатной температуре в течение 15–30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 180 с.