Phospho-Acetyl CoA Carboxylase 1-S79 Rabbit mAb (AP1464)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинг лизатов клеток линии A-431 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированной форме ацетил-КоА-карбоксилазы 1 (по остатку серина 79) (Phospho-Acetyl CoA Carboxylase 1-S79 Rabbit mAb, артикул AP1464) в разведении 1:1000. Клетки A-431 предварительно инкубировали с λ-фосфатазой (λpp) при 37 °C в течение 1 часа. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку геля наносили 25 мкг общего белка. Блокирование неспецифического связывания осуществляли с помощью 3% раствора обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 60 с.

Клетки A-431 подвергли конфокальной визуализации с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированной ацетил-КоА-карбоксилазе 1 (Ser79) (AP1464, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьим антикроличьим IgG (H+L), конъюгированным с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красный сигнал). Для контрастного окрашивания применяли мышиное моноклональное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьим антимышиным IgG (H+L), конъюгированным с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленый сигнал). Ядра клеток окрашивали DAPI (синий сигнал). Увеличение объектива: 100x.

Клетки линии C6 подвергли конфокальной визуализации с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированной ацетил-КоА-карбоксилазе 1 (по остатку Ser79) (AP1464, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими антителами против IgG кролика (H+L), конъюгированными с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красная флуоресценция). Для контрастного окрашивания применяли мышиное моноклональное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьими антителами против IgG мыши (H+L), конъюгированными с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленая флуоресценция). Ядра клеток окрашивали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100x.