Phospho-EGFR-Y845 Rabbit mAb (AP1492)

Клетки линии A-431, обработанные и необработанные эпидермальным фактором роста (EGF), были проанализированы методом конфокальной микроскопии. Образцы окрашивали моноклональным кроличьим антителом к фосфорилированному EGFR (Tyr845) (AP1492, разведение 1:200) с последующей инкубацией с козьими анти-кроличьими антителами к тяжелым и легким цепям IgG, конъюгированными с Cy3 (AS007, разведение 1:500) (красная флуоресценция). Для контрастного окрашивания использовали моноклональное мышиное антитело к α-тубулину (AC012, разведение 1:400) с последующей инкубацией с козьими анти-мышиными антителами к тяжелым и легким цепям IgG, конъюгированными с ABflo® 488 (AS076, разведение 1:500) (зеленая флуоресценция). Ядра клеток окрашивали DAPI (синяя флуоресценция). Увеличение объектива: 100x.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии A-431 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному EGFR (тирозин 845) (AP1492) в разведении 1:1000. Инкубацию первичного антитела осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки A-431 подвергали сывороточному голоданию в течение ночи, после чего обрабатывали эпидермальным фактором роста (EGF) в концентрации 200 нг/мл при 37°C в течение 30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование несpecificных сайтов связывания проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию сигналов выполняли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 20 секунд.