Phospho-eIF2α-S51 Rabbit mAb (AP0692)

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток линии C6 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированной форме eIF2α (по серину 51) (AP0692) в разведении 1:10 000. Инкубацию с первичным антителом осуществляли в течение ночи при температуре 4°C. Клетки C6 предварительно подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали кальциевой кислотой (CA) в концентрации 100 нМ при 37°C в течение 30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10 000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование неспецифического связывания проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 30 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток NIH/3T3 с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному eIF2α (Ser51) (AP0692) в разведении 1:5000. Инкубацию первичного антитела осуществляли при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Клетки NIH/3T3 подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали кальмикулином А (CA) в концентрации 100 нМ при 37 °C в течение 30 минут. В качестве вторичного антитела использовали конъюгированное с пероксидазой хрена (HRP) козье антитело против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг белка. Блокирование проводили с использованием 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию осуществляли с помощью набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 20 с.

Проведен анализ методом вестерн-блоттинга лизатов клеток HeLa с использованием кроличьего моноклонального антитела к фосфорилированному eIF2α (Ser51) (AP0692) в разведении 1:5000. Инкубацию проводили при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Клетки HeLa предварительно подвергали голоданию по сыворотке в течение ночи, после чего обрабатывали кальмикулином А (CA) в концентрации 100 нМ при 37°C в течение 30 минут. В качестве вторичных антител использовали конъюгированные с пероксидазой хрена (HRP) козьи антитела против IgG кролика (H+L) (AS014) в разведении 1:10000. На дорожку наносили 30 мкг общего белка. Блокирование осуществляли с помощью 3% обезжиренного сухого молока в буфере TBST. Детекцию проводили с использованием набора ECL Basic Kit (RM00020), время экспозиции составило 45 с.